滅菌法系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生 物殺滅或除去，從而使物品殘存活微生物的概率下降**預(yù)期 的無(wú)菌保證水平的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療 器械等物品的滅菌。 無(wú)菌物品是指物品中不含任何活的微生物。對(duì)于任 何 一批滅菌物品而言，**無(wú)菌既無(wú)法保證也無(wú)法用試驗(yàn)來(lái)證 實(shí)。一批物品的無(wú)菌特性只能相對(duì)地通過(guò)物品中活微生 物 的概率低**某個(gè)可接受的水平來(lái)表述，即無(wú)菌保證水 平 (sterility assurance level ，簡(jiǎn)稱SAL) 。實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，滅 菌是指將物品中污染微生物的概率下降**預(yù)期的無(wú)菌 保 證水平。**終滅菌的物品微生物存活概率，即無(wú)菌保證 水 平不得高于 10 一6 。 已滅菌物品達(dá)到的無(wú)菌保證水平可 通 過(guò)驗(yàn)證確定。 滅菌物品的無(wú)菌保證不能依賴于**終產(chǎn)品的無(wú)菌檢驗(yàn)， 而是取決于生產(chǎn)過(guò)程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP 管理和良好的無(wú)菌保證體系。滅菌工藝的確定應(yīng)綜合考慮被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌方法的有效性和經(jīng)濟(jì)性、滅菌后物品的完整性和穩(wěn)定性等因素。 滅菌程序的驗(yàn)證是無(wú)菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后，方可交付正式使用。驗(yàn)證內(nèi)容包括：  

(1) 撰寫驗(yàn)證方案及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。  

(2) 確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝正確，并能處于正常運(yùn)行（安裝確認(rèn)）。  (3) 確認(rèn)滅菌設(shè)備、關(guān)鍵控制和記錄系統(tǒng)能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行（運(yùn)行確認(rèn)）。  

(4) 采用被滅菌物品或模擬物品按預(yù)定滅菌程序進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，確認(rèn)各關(guān)鍵工藝參數(shù)符合預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)，確定經(jīng)滅菌物品的無(wú)菌保證水平符合規(guī)定（性能確認(rèn)）。  (5) 匯總并完善各種文件和記錄，撰寫驗(yàn)證報(bào)告。  日常生產(chǎn)中，應(yīng)對(duì)滅菌程序的運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力、時(shí)間、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻照劑量等）均在驗(yàn)證確定的范圍內(nèi)。滅菌程序應(yīng)定期進(jìn)行再驗(yàn)證。當(dāng)滅菌設(shè)備或程序發(fā)生變更（包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。  

物品的無(wú)菌保證與滅菌工藝、滅菌前物品被污染的程度及污染菌的特性相關(guān)。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌工藝的特點(diǎn)制定滅菌物品滅菌前的微生物污染水平及污染菌的耐受限度并進(jìn)行監(jiān)控，并在生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)采取各種措施降低污染，確保微生物污染控制在規(guī)定的限度內(nèi)。 

滅菌的冷卻階段，應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。任何情況下，都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保物品在有效期內(nèi)符合無(wú)菌要求。  

滅菌方法 

常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法和過(guò)濾除菌法?？筛鶕?jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。只要物品允許，應(yīng)盡可能選用**終滅菌法滅菌。若物品不適合采用**終滅菌法，可選用  過(guò)濾除菌法或無(wú)菌生產(chǎn)工藝達(dá)到無(wú)菌保證要求，只要可能，應(yīng)對(duì)非**終滅菌的物品作補(bǔ)充性滅菌處理（如流通蒸汽滅菌）。  一、濕熱滅菌法  

本法系指將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽、過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。該法滅菌能力強(qiáng)，為熱力滅菌中**有效、應(yīng)用**廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣、膠塞以及  其他遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品，均可采用本法滅菌。流通蒸汽不能有效殺滅細(xì)菌孢子，一般可作為不耐熱無(wú)菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。濕熱滅菌條件的選擇應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力、微生物污染程度等因素。濕熱滅菌條件通常采 用121°C  X15min、12rC  X30min或116匸X40min的程序，也可采用其他溫度和時(shí)間參數(shù)，但無(wú)論采用何種滅菌溫度和時(shí)間參數(shù)，都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在日常運(yùn)行過(guò)程中能確保物品滅菌后的SAL 《10— S 。當(dāng)滅菌程序的選定采用F。值概念時(shí)（F。值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間，系滅菌過(guò)程賦予被滅菌物品121"C下的滅菌時(shí)間），應(yīng)采取特別措施確保被滅菌物品能得到足夠的無(wú)菌保證，此時(shí)，除對(duì)滅菌程序進(jìn)行驗(yàn)證外，還必須在生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)微生物進(jìn)行監(jiān)控，證明污染的微生物指標(biāo)低于設(shè)定的限度。對(duì)熱穩(wěn)定的物品，滅菌工藝可**過(guò)度殺滅法，以保證被滅菌物品獲得足夠的無(wú)菌保證值。熱不穩(wěn)定性物品，其滅菌工藝的確定依賴于在一定的時(shí)間內(nèi)，一定的生產(chǎn)批次的被滅菌物品滅菌前微生物污染的水平及其耐熱性。因此，日常生產(chǎn)全過(guò)程應(yīng)對(duì)產(chǎn)品中污染的微生物進(jìn)行連續(xù)地、嚴(yán)格地監(jiān)控，并采取各種措施降低物品微生物污染水  平，特別是防止耐熱菌的污染。熱不穩(wěn)定性物品的F „ 值一般不低于8 分鐘。  采用濕熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式，不能排列過(guò)密，以保證滅菌的有效性和均一性。  

濕熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時(shí)可能存在的 冷 點(diǎn)。當(dāng)用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)滅菌效果時(shí)，應(yīng)將其置于冷點(diǎn)處。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽抱桿菌孢 子 (Spores of Bacillus stearothermophilus) D  二、干熱滅菌法  

本法系指將物品置于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中，利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫伹不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。 干熱滅菌條件一般為160?：170X;  X120min以上、170? 180t;X60min以上或250"  X45min以上，也可采用其他溫度和時(shí)間參數(shù)。無(wú)論采用何種滅菌條件，均應(yīng)保證滅菌后的物品的SAL 《10- S 。采用千熱過(guò)度殺滅后的物品一般無(wú)需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測(cè)定。250 t  X45mi n 的干熱滅菌也可除去無(wú)菌產(chǎn)品包裝容器及有關(guān)生產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。  #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#

采用干熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式，不能排列過(guò)密，以保證滅菌的有效性和均一性。干熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)及確定**冷點(diǎn)位置等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子（Spores of Bacillus  subtilis)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過(guò)程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000 單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加人待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素**少下降3 個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素（EscAericftia coli  endoxin)。  =、輻射滅菌法  

本法系指將物品置于適宜放射源輻射的Y 射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法**常用的為6 °Co-7" 射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。采用輻射滅菌法滅菌的無(wú)菌物品其SAL 應(yīng)《1CTS。 y 射線輻射滅菌所控制的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物**大數(shù)量及**強(qiáng)抗輻射力，事先應(yīng)驗(yàn)證所使用的劑量不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩(wěn)定性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對(duì)**終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)滅菌過(guò)程賦予該滅菌物品的無(wú)菌k 證水平。對(duì)于已設(shè)定的劑量，應(yīng)定期審核，以驗(yàn)證其有效性。滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收  的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì)，劑量計(jì)要置于規(guī)定的部位。在初安裝時(shí)劑量計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)源進(jìn)行校正，并定期進(jìn)行再校正。  

6 °Co- 7 射線輻射滅菌法常用的生物指示劑為短小芽抱桿菌抱子(Spores  of Bacillus pumilus)。  四、 氣體滅菌法  

本法系指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過(guò)氧化氫、甲醛、臭氧 (0 3 ) 等，本法適用于在氣體中穩(wěn)定的物品滅菌。采用氣體滅菌法時(shí)，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。  本法中**常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80%?90%的惰性氣體混合使用，在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行。該法可用于醫(yī)療器械、塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用本法滅菌。  采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間是影響滅菌效果的重要因素?？刹捎孟铝袦缇鷹l件： 溫度  54°C±10° C  相對(duì)濕度  60% 士 10%  滅菌壓力  8X105 Pa  滅菌時(shí)間  90min  

滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時(shí)，將滅菌腔室抽成真空，然后通人蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定的溫濕度平衡的額定值，再通人經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度，整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后，應(yīng)采取新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘留物消散。并對(duì)滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過(guò)規(guī)定的濃度，避免產(chǎn)生毒性。  

采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，應(yīng)進(jìn)行泄漏試驗(yàn)，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性。滅菌程序確認(rèn)時(shí)，還應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室中物品的排列方式對(duì)滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響。生物指示劑一般采用枯草芽孢桿菌孢子（Spores  of Bacillus sub­ tilis )。  

五、 過(guò)濾除菌法  

本法系利用細(xì)菌不能通過(guò)致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。常用于氣體、熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。 除菌過(guò)濾器采用孔徑分布均勻的微孔濾膜作過(guò)濾材料， 微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。濾膜材質(zhì)依過(guò)濾物品的性質(zhì)及過(guò)濾目的而定。藥品生產(chǎn)中采用的除菌濾膜孔徑一般不超過(guò)0.22fOn 。過(guò)濾器的孔徑定義來(lái)自過(guò)濾器對(duì)微生物的截留，而非平均孔徑的分布系數(shù)。所以，用于**終除菌的過(guò)濾器必須選擇具有截留實(shí)驗(yàn)證明的除菌級(jí)過(guò)濾器。過(guò)濾器對(duì)濾液的吸附不得影響藥品質(zhì)量，不得有纖維脫落，禁用含石棉的過(guò)濾器。過(guò)濾器的使用者應(yīng)了解濾液過(guò)濾過(guò)程巾的析出物性質(zhì)、數(shù)量并評(píng)估其毒性影響。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理，并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或做在線滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器,再更換濾芯或?yàn)V膜或直接更換濾器。 過(guò)濾過(guò)程中無(wú)菌保證與過(guò)濾液體的初始生物負(fù)荷及過(guò)濾器的對(duì)數(shù)下降值LRVdo g  reductionvalue)有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下，被過(guò)濾液體過(guò)濾前的微生物數(shù)量與過(guò)濾后的微生物數(shù)量比的常用對(duì)數(shù)值。S卩：  LRV=lgN„-lg N  

式中 N 。為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量；  N 為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。  

LRV 用于表示過(guò)濾器的過(guò)濾除菌效率，對(duì)孔徑為0.  22f.ni 的過(guò)濾器而言，要求每lcm 2 有效過(guò)濾面積的LRV 應(yīng)不小于7 。因此過(guò)濾除菌時(shí)，被過(guò)濾產(chǎn)品總的污染量應(yīng)控制在規(guī)定的限度內(nèi)。為保證過(guò)濾除菌效果，可使用兩個(gè)除菌級(jí)的過(guò)濾器串連過(guò)濾，或在灌裝前用過(guò)濾器進(jìn)行再次過(guò)濾。  #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#

在過(guò)濾除菌中，一般無(wú)法對(duì)全過(guò)程中過(guò)濾器的關(guān)鍵參數(shù) (濾膜孔徑的大小及分布，濾膜的完整性及LRV) 進(jìn)行監(jiān)控。 因此，在每一次過(guò)濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性試驗(yàn)，即氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn)，確認(rèn)濾膜在除菌過(guò)濾過(guò)程中的有效性和完整性。完整性的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)來(lái)自于相關(guān)細(xì)菌截留實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。除菌過(guò)濾器的使用時(shí)間應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，一般不應(yīng)超過(guò)一個(gè)工作日。  過(guò)濾除菌法常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌（Pw"do-monas diminuta )。 通過(guò)過(guò)濾除菌法達(dá)到無(wú)菌的產(chǎn)品應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止再污染。  六、無(wú)菌生產(chǎn)工藝  

無(wú)菌生產(chǎn)工藝系指必須在無(wú)菌控制條件下生產(chǎn)無(wú)菌制劑的方法，無(wú)菌分裝及無(wú)菌凍干是**常見(jiàn)的無(wú)菌生產(chǎn)工藝。后者在工藝過(guò)程中須采用過(guò)濾除菌法。 無(wú)菌生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，并應(yīng)在無(wú)菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止被再次污染。 無(wú)菌生產(chǎn)工藝過(guò)程的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證。在生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境的無(wú)菌空氣質(zhì)量、操作人員的素質(zhì)、各物品的無(wú)菌性。  

無(wú)菌生產(chǎn)工藝應(yīng)定期進(jìn)行驗(yàn)證，包括對(duì)環(huán)境空氣過(guò)濾系  統(tǒng)有效性驗(yàn)證及培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。  生物指示 劑  

生物指示劑系一類特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的抱子，  

1. 制備生物指示劑用微生物的基本要求  不同的滅菌方法使用不同的生物指示劑，制備生物指示劑所選用的微生物必須具備以下特性：  

(D 菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌物品中所有可能污染菌  的耐受性。  

(2) 菌種應(yīng)無(wú)致病性。 

(3)  菌株應(yīng)穩(wěn)定。存活期長(zhǎng)，易于保存。  

(4) 易于培養(yǎng)。若使用休眠孢子，生物指示劑中休眠孢子  含量要在90% 以上。  2.  生物指示劑的制備  

生物指示劑的制備應(yīng)按一定的程序進(jìn)行，制備前，需先確  

定所用微生物的特性，如D 值（微生物的耐熱參數(shù)，系指一定 溫度下，將微生物殺滅90%所需的時(shí)間，以分鐘表示）等。菌  株應(yīng)用適宜的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)物應(yīng)制成懸浮液，其中  孢子的數(shù)量應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，孢子應(yīng)懸浮于無(wú)營(yíng)養(yǎng)的液體中保存。  生物指示劑中包含一定數(shù)量的一種或多種抱子，可制成  

多種形式。通常是將一定數(shù)量的抱子附著在惰性的載體上，  

如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料制品等；孢子懸浮液也可密封于  安瓿中；有的生物指示劑還配有培養(yǎng)基系統(tǒng)。D 值除與滅菌  條件相關(guān)外，還與微生物存在的環(huán)境有關(guān)。因此，一定形式的  生物指示劑制備完成后，應(yīng)測(cè)定D 值和抱子總數(shù)。生物指示  劑應(yīng)選用合適的材料包裝，并設(shè)定有效期。載體和包裝材料  在保護(hù)生物指示劑不致污染的同時(shí)，還應(yīng)保證滅菌劑穿透并  能與生物指示劑充分接觸。載體和包裝的設(shè)計(jì)原則是便于貯  

存、運(yùn)輸、取樣、轉(zhuǎn)移接種。有些生物指示劑可直接將抱子接種**液體滅菌物或具有與其相似的物理和化學(xué)特性的替代品中。使用替代品時(shí)，應(yīng)用數(shù)據(jù)證明二者的等效性。  

3.  生物指示劑的應(yīng)用  

在滅菌程序的驗(yàn)證中，盡管可通過(guò)滅菌過(guò)程某些參數(shù)的監(jiān)控來(lái)評(píng)估滅菌效果，但生物指示劑的被殺滅程度，則是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性**直觀的指標(biāo)。可使用巿售的標(biāo)準(zhǔn)生物  指示劑，也可使用由日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離的耐受性**強(qiáng)的微生物制備的抱子。在生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定孢子在實(shí)際滅菌條件下的D 值，并測(cè)定孢子的純度和數(shù)量。 驗(yàn)證時(shí)，生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強(qiáng)，以保證滅菌程序有更大的安全性。在**終滅菌法中，生物指示劑應(yīng)放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng)，確定生物指示劑中的孢子是否被完全殺滅。 過(guò)度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對(duì)滅菌手段耐受性差的產(chǎn)品，設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的水平，選擇生物指示劑的菌種和孢子數(shù)量。這類產(chǎn)品的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估。  4.  常用生物指示劑  

(1) 濕熱滅菌法濕熱滅菌法**常用的生物指示劑為 嗜  

熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores  of  Bacillus stearothermophilus ,  

如NCT C  10  007、NCIMB 8157,ATCC  7953)。  D 值為 1 .  5?  3.  Omin ，每片（或每瓶）活孢子數(shù)5  X  105  ~5  X  10s 個(gè)，在  

12rC 、19min 下應(yīng)被完全殺滅。此外，還可使用生抱梭菌孢子（Spores of Clostridium sporogenes ，如NCTC  8594、NCIMB  8053, ATC C  7955) ，D值為0. 4?0. 8rain。  

(2) 干熱滅菌法 干 熱滅菌法**常用的生物指示劑為 枯  #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#

草芽孢桿菌孢子（Spores  of Bacillus subtilis ,如NCIMB  8058、  ATC C  9372)。  D 值大于1 .  5min，每片活孢子數(shù)5 X 105  ~5 X  10 6 個(gè)。去熱原驗(yàn)證時(shí)使用大腸埃希菌內(nèi)毒素（Ewfeehc^ a  coli  endoxin)，加量不小于1000細(xì)菌內(nèi)毒素單位。  (3) 輻射滅菌法輻射滅菌法**常用的生物指示劑為 短小芽孢桿菌孢子 (Spore s  of  Bacillus  pumilus ，如  

NCT C  10  327,NCIMB 10  692, ATC C  27  142)。每片活孢子  數(shù)107 ?：L08 ，置于放射劑量25kGy條件下，D值約3kGy。但  應(yīng)注意滅菌物品中所負(fù)載的微生物可能比短小芽抱桿菌孢子  顯示更強(qiáng)的抗輻射力。因此短小芽孢桿菌孢子可用于監(jiān)控滅 菌過(guò)程，但不能用于滅菌輻射劑量建立的依據(jù)。  

(4) 氣體滅菌法環(huán)氧乙烷滅菌**常用的生物指示劑 為  枯草芽孢桿菌孢子（Spore s  of  Bacillus  ，如NCT C  10073,ATCC 9372 )。氣態(tài)過(guò)氧化氫滅菌**常用的生物指示  

劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子（Spores  of  Bacillus stearother-mophilus,ia  NCTC  10007,NCIMB 8157.ATCC  7953)。每片  

活孢子數(shù)1X10 S ?5X10 6 個(gè)。環(huán)氧乙烷滅菌中，枯草芽孢桿  菌孢子D 值大于2.5min ，在環(huán)氧乙烷濃度為600m g /L ，相對(duì)  濕度為60%，溫度為54°C下滅菌，60min應(yīng)被殺滅。  (5) 過(guò)濾除菌法過(guò)濾除菌法**常用的生物指示劑為 缺  

陷假單胞菌（i^eudomonas  &mi""M ,如ATCC19  146),用于  濾膜孔徑為0 .  22pm的濾器；黏質(zhì)沙雷菌（Serratia  marcescens）(ATCC  14756)用于濾膜孔徑為0.  45 F m 的濾器。